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Table 4 Accuracy and precision parameters of the developed UHPLC–MS method

From: Determination of immunogenic proteins in biopharmaceuticals by UHPLC–MS amino acid analysis

  Within-run, n = 6 Between-run, n = 12
Mean found concentration (µM) RE (% Nom.) RSD (%) Mean found concentration (µM) RE (% Nom.) RSD (%)
Glycine
 5 µM 4.50 − 9.00 3.14 4.90 − 2.00 9.72
 50 µM 50.45 0.90 7.99 49.07 − 1.86 5.59
 250 µM 254.55 1.82 6.81 240.60 − 3.76 6.69
Alanine
 5 µM 4.70 − 6.00 3.01 4.55 − 9.00 8.98
 50 µM 49.25 − 1.50 0.43 48.87 − 2.26 1.70
 250 µM 256.30 2.52 2.59 247.52 − 0.99 3.05
Serine
 5 µM 4.55 − 9.00 7.77 4.68 − 6.40 6.39
 50 µM 49.15 − 1.70 2.45 48.45 − 3.10 4.04
 250 µM 253.50 1.40 2.79 253.1 1.24 2.77
Proline
 5 µM 4.80 − 4.00 2.95 4.78 − 4.40 2.78
 50 µM 49.90 − 0.20 7.09 50.63 1.26 3.85
 250 µM 259.75 3.90 2.37 252.35 0.94 3.77
Valine
 5 µM 4.78 − 4.4 5.51 4.73 − 5.40 4.56
 50 µM 48.90 − 2.20 2.60 50.65 1.30 4.12
 250 µM 249.85 − 0.06 0.25 245.90 − 1.64 2.00
Threonine
 5 µM 4.95 − 1.00 7.14 4.62 − 7.60 7.43
 50 µM 49.95 − 0.10 0.71 49.05 − 1.90 3.23
 250 µM 251.25 0.50 1.21 240.7 − 3.72 3.77
Cysteine
 2.5 µM 2.60 4.00 5.44 2.53 1.20 4.11
 25 µM 25.05 0.20 3.11 24.73 − 1.08 4.22
 125 µM 122.78 − 1.78 2.85 120.44 − 3.65 2.45
Isoleucine
 5 µM 5.05 1.00 1.40 4.98 − 0.40 3.90
 50 µM 49.60 − 0.80 3.42 50.45 0.90 2.73
 250 µM 258.35 3.34 4.79 247.37 − 1.05 4.24
Leucine
 5 µM 4.85 − 3.00 1.46 4.72 − 5.60 4.91
 50 µM 48.95 − 2.10 3.61 48.92 − 2.16 1.67
 250 µM 252.95 1.18 5.40 243.43 − 2.63 4.32
Asparagine
 5 µM 5.30 6.00 8.22 4.98 − 0.40 11.57
 50 µM 53.75 7.50 0.13 52.60 5.20 1.93
 250 µM 249.75 − 0.10 2.58 242.53 − 2.99 2.64
Aspartic acid
 5 µM 4.65 − 7.00 1.52 4.43 − 11.40 11.31
 50 µM 51.35 2.70 4.82 47.82 − 4.36 6.73
 250 µM 262.40 4.96 11.97 247.03 − 1.19 7.91
Glutamine
 5 µM 4.85 − 3.00 1.46 4.53 − 9.40 5.52
 50 µM 53.25 6.50 2.26 52.48 4.96 2.20
 250 µM 245.15 − 1.94 5.51 245.32 − 1.87 3.18
Lysine       
 5 µM 4.95 − 1.00 6.70 4.85 − 3.00 6.22
 50 µM 52.00 4.00 1.90 51.62 3.24 3.29
 250 µM 252.70 1.08 0.39 246.60 − 1.36 3.71
Glutamic acid
 5 µM 4.75 − 5.00 1.49 4.67 − 6.60 1.75
 50 µM 50.20 0.40 8.48 48.28 − 3.44 4.07
 250 µM 261.10 4.44 6.07 260.27 4.11 3.15
Methionine
 5 µM 4.75 − 5.00 1.49 4.97 − 0.60 4.35
 50 µM 50.20 0.40 5.92 49.03 − 1.94 4.25
 250 µM 253.20 1.28 6.26 245.90 − 1.64 3.88
Histidine       
 5 µM 4.63 − 7.40 10.65 4.72 − 5.60 9.40
 50 µM 50.60 1.12 2.80 49.05 − 1.90 4.71
 250 µM 251.70 0.68 2.59 249.07 − 0.37 2.22
Phenylalanine
 5 µM 4.85 − 3.00 1.46 4.80 − 4.00 1.86
 50 µM 47.85 − 4.30 4.29 46.45 − 7.10 3.56
 250 µM 258.00 3.20 1.21 249.48 − 0.21 3.79
Arginine
 5 µM 4.95 − 1.00 4.29 4.62 − 7.60 7.17
 50 µM 48.45 − 3.10 2.19 48.77 − 2.46 6.86
 250 µM 258.15 3.26 0.36 245.08 − 1.97 5.06
Tyrosine
 5 µM 4.77 − 4.60 1.21 4.63 − 7.40 3.53
 50 µM 49.30 − 1.40 3.44 47.22 − 5.56 4.11
 250 µM 256.05 2.42 6.43 246.23 − 1.51 5.26
Tryptophan
 5 µM 5.15 3.00 1.37 4.98 − 0.40 6.14
 50 µM 49.55 − 0.90 2.14 50.40 0.80 2.70
 250 µM 263.90 5.56 9.59 254.52 1.81 5.57